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本制品是百奥莱博公司基于间接竞争ELISA方法开发的，专门用于肌肉组织、牛奶等样品中的地塞米松(DEX)含量检测的试剂盒。本试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。

检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的地塞米松药物和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗地塞米松药物抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含地塞米松药物含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中地塞米松药物的残留量。

• 仪器：酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）。
  
• 微量移液器：单道20μL～200μL，100μL～1000μL、多道300μL。
  
• 试剂：乙酸乙酯、NaOH、正己烷。

• 试剂盒各组份从冷藏环境中取出时，必须平衡至室温后，方可开封启用。未使用完的试剂组份应及时放回2～8℃密封保存。
  
• 试剂盒请在有效期内使用，拆开的试剂盒尽量在3个月内用完，以免拆开后保存不当失效。
  
• 试剂盒在使用过程中，不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
  
• 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象，所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
  
• 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。
  
• 试剂盒中有些组分具有腐蚀性或毒性，避免接触皮肤。
  
• 本方法为筛选方法，如遇阳性样本请用确证方法进行确认。

• 样本处理前须知：实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。
  
• 配液：
  
  • 2M氢氧化钠溶液：称40gNaOH加去离子水混匀溶解，定容至500mL。
    
  • 0.3M氢氧化钠溶液：取2M氢氧化钠溶液75mL，加去离子水定容至500mL。
    
  • 复溶液：将2×复溶液用去离子水2倍稀释（1份复溶液加1份去离子水），用于样本的复溶，复溶液在4℃环境可保存一个月。
    
  • 工作洗涤液：将浓缩洗涤液20倍稀释(1份洗涤液加19份去离子水)。
• 样本前处理步骤：
  
  • 肌肉组织样本处理方法：
    
    • 称取均质后的样本2±0.05g于50mL离心管中，加入8mL乙酸乙酯，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；
      
    • 取上层液体4mL至50mL离心管中，加入4mL 2M氢氧化钠溶液，振荡5min，室温4000转/分离心10分钟；
      
    • 取2mL上层有机相至10mL洁净干燥玻璃试管中，在50～60℃下氮气吹干；
      
    • 加入1mL复溶液溶解干燥的残渣，振荡2min；
      
    • 取100μL进行分析。
    样本稀释倍数：2；检测下限：0.2ppb。
  • 牛奶样本处理方法：
    
    • 取200μL牛奶样本，加入0.8mL复溶液工作液充分混匀；
      
    • 取100μL进行分析。
    样本稀释倍数：5；检测下限：0.5ppb。
  • 饲料样本处理方法：
    
    • 称取碾碎后的饲料样本1±0.05g于50mL离心管中，加入4mL 0.3M氢氧化钠溶液，振荡混匀，再加入8mL乙酸乙酯，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；
      
    • 取1mL上层有机相至10mL洁净干燥玻璃试管中，在50～60℃下氮气吹干；
      
    • 加入1mL正己烷溶解干燥的残渣，再加1mL复溶液，振荡2min；
      
    • 室温4000转/分离心5分钟；
      
    • 去上层，取下层水相100μL进行分析。
    样本稀释倍数：8；检测下限：1ppb。

• 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
  
• 加样反应：加标准品应用液或样本50μL/孔到各自的微孔中，然后加抗体工作液50μL/孔，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光反应30分钟。
  
• 洗涤：小心揭开盖板膜，甩去孔内液体，每孔加350μL工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干。
  
  用吸水纸拍干，拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破。
  
  
• 加酶反应：加酶标记物100μL/孔，25℃避光反应30分钟。
  
• 洗涤：同上
  
• 显色：加底物液A 50μL/孔，再加底物液B 50μL/孔，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光显色15分钟。
  
  若蓝色过浅，可适当延长反应时间。
  
  
• 终止：加终止液50μL/孔，轻轻振荡混匀，终止反应。
  
• 测吸光值：用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应在终止反应后10分钟内完成。

• 百分吸光率的计算：
  标准液或样本的百分吸光率等于标准液或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准液（0ppb）的吸光度值，再乘以100%，如下所示。
  

  百分吸光度值(%)＝	A	×100%
  	A0

  
  A：标准溶液或样本溶液的平均吸光度值；
  A₀：0ppb标准溶液的平均吸光度值。
  
• 标准曲线的绘制与计算：
  以标准液百分吸光率为纵坐标，对应的标准液浓度（ppb）的对数为横坐标，绘制标准液的半对数曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度。